超声波破碎在植物SOD提取中的应用

添加人：admin 发布时间：2015/11/14 8:36:23 来源：中国破碎机网

　　超声波破碎在植物SOD提取中的应用大连民族学院生物工程系2001级冯艳伟，于琳琳，艾勇SOD即超氧化物歧化酶，是一种广泛存在于动植物及微生物体中的金属酶，能催化超氧负离子发生歧化反应，有效清除机体内的超氧自由基，对生物体有保护作用，因而具有抗辐射，抗肿瘤及延缓机体衰老等功能。本实验以大蒜为原料，对超声波破碎进行了研究，与传统破碎方法相比，SOD总收率有所提高，并取得了最佳破碎条件。
　　1材料与方法1.1材料与试剂。新鲜蒜瓣（市售）；三羟甲基胺基甲烷、邻苯三酚、乙二胺四乙酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化氢、丙酮等化学试剂均为分析纯。
　　1.2仪器。TDL*50B低速台式大容量离心机、DS*高速组织匀浆机、752紫外可见分光光度计、JY92―丨丨超声波细胞粉碎机、TA2104H电子天平。
　　1.3实验方法1.3.1超声波破碎功率及破碎时间的确定取新鲜蒜瓣，去皮洗净，用匀浆机匀浆1.5mm，分别分成6组、8组，每组30g，取6组分别用200450W功率超声波破碎4min，另取8组按上述确定的功率破碎07.0min，在每组蒜汁中加入1.5倍体积0.05MpH7.8的磷酸缓冲液，浸提8h（4*C），离心得浸提液，测定浸提液中的总蛋白含量及总酶活性，取三次的平均值。
　　1.3.2分析方法SOD酶活的测定：采用邻苯三酚自氧化法测定。SOD酶活性单位的定义：在1mL反应液中每分钟抑制邻苯三酚自氧化速率50%时的酶量为一个酶活单位。总蛋白浓度测定：在浸提液中加入1.2倍体积冷丙酮（4*C），离心得沉淀，冷冻千燥后，用天平称量。
　　2结果与讨论2.2超声波破碎时间对SOD的提取率及活性的影响在一定的功率下，考察不同破碎时间所得浸提液的总蛋白含量和总酶活性。在03min时总蛋白含量基本接近，总酶活及比活基本不变，说明破碎的细胞数量没有增多，SOD的活性也没有损失；在37min时总蛋白含量提高了5%左右，但在6mn后酶的比活有所下降，说明超声波使部分酶失活，由可以得出，最佳破碎时间为破碎时间对SOD提取率及活性的影响3结论通过对从大蒜中抽提SOD工艺的研究发现，用超声波破碎细胞可使SOD的收率提高3%5*%，最佳破碎条件为300W、5min（不同植物最佳条件会有所差异）。
　　2.1超声波破碎功率对SOD的提取率及活性的影响在相同时间内，考察不同功率下的破碎情况。在0250W时，总蛋白含量与比活性基本不变，说明超声波对细胞破碎及酶活性作用不很明显；在300450W时，总蛋白含量有所提高，但在350450W时，酶的比活有下降趋势，说明酶的活性有损失，由可以得出，最佳破碎功率为300W.